1.雌雄鉴别。
虹鳟的雄鱼头部较小，吻端较尖，下颌向上弯曲呈尖钩形，体较高，腹部不膨大，尾叉较浅，生殖孔呈白色，不突出。雌鱼体形细长，吻端圆钝，上下颌等长，下腹部膨大，生殖孔稍外突呈粉红色，尾叉较深呈鲜红色。
2.成熟度鉴别。
雄鱼的成熟度以能否挤出精液来识别。雌鱼的成熟度的识别常以触感为主，雌鱼腹部膨大柔软，生殖孔红肿外突，若将尾部倒提，可见两侧轮廓明显。成熟卵子由卵巢落入体腔后，若滞留时间过长，其受精率会下降，故需适时采卵，严防过熟，一般以从卵巢排入体腔的前4天的卵质量最好，少数在7天内还是最适采卵期，故一般每隔7天挑选雌鱼一次。
3.采精。
采精有两种，一种是把雄鱼精液直接挤在卵上，每8-10尾雌鱼卵，用3尾雄鱼精液即可。另一种是把精液预先贮于烧杯等容器内，置于8℃以下的阴凉处备用，每次按需要量用吸管加到卵上。采精后的雄鱼过几天又可重复采精。
4.采卵和授精。
采用挤压法，一人用手握住雌鱼头部，另一人用左手握住尾部，头部朝上，背部朝向操作者，腹部朝下对准带孔的接卵盆，待鱼平静后，用右手从腹部顺着生殖孔方向，由上往下轻轻挤压。卵在受精前先用一种等渗盐溶液(氯化钠90.4克，氯化钾2.4克，氯化钙2.6克，依次溶于10升水中，水温调至4℃以上)洗涤，然后加入精液授精。每万粒卵用5-10毫升精液充分搅拌1-2分钟，使精卵充分接触，再加入少量清水，快速而均匀地搅拌1-2分钟，在确认所剩精子已全部丧失授精能力后，再换水数次，静置1小时，待卵充分吸水膨胀后再装盘孵化。
