今天跟大家分享一篇文章：IRAK1和IRAK4在尼罗罗非鱼体内的分子特征、表达及功能分析，文章引用信息如下：
尼罗罗非鱼（Oreochromisniloticus）是最重要的经济物种之一，在世界范围内广泛养殖。然而，近年来，尼罗罗非鱼养殖业受到严重的疾病影响，尤其是无乳链球菌的感染。
白介素-1受体相关激酶(IRAK1)和IRAK4是关键的信号传递介质，在TLR/IL-1R介导的先天性免疫和炎症反应中发挥关键作用。
在这项研究中，研究人员首先在尼罗罗非鱼中鉴定了IRAK1和IRAK4（OnIRAK1和OnIRAK4），并检测了它们在健康成鱼体内和胚胎发育过程中的组成型表达。然后评估了OnIRAK1和OnIRAK4在无乳链球菌感染后的体内诱导表达以及LPS，PolyI：C（聚肌苷酸多聚胞苷酸），无乳链球菌和△CPS（荚膜多糖基因簇缺失菌株）的体外诱导表达。此外，构建了OnIRAK1和OnIRAK4重组质粒并在293T细胞中过表达，分别确定了其细胞内定位和信号转导功能。
OnIRAK1和OnIRAK4的cDNA和基因组序列
图1.OnIRAK1（A）和OnIRAK4（B）的域组织和基因组结构的示意图
OnIRAK1和OnIRAK4的序列分析
图2.基于尼罗罗非鱼和其他脊椎动物IRAK1和IRAK4氨基酸序列推断的系统发育树
OnIRAK1和OnIRAK4的组织分布
图3.通过实时PCR确定OnIRAK1和OnIRAK4在健康鱼体中的组织分布
OnIRAK1和OnIRAK4在胚胎发育过程中的表达谱
图4.胚胎发育过程中OnIRAK1和OnIRAK4mRNA的表达
OnIRAK1和OnIRAK4在无乳链球菌感染的尼罗罗非鱼组织中的表达
图5无乳链球菌感染后，OnIRAK1和OnIRAK4在肠，腮，脾，肾和血液中的表达谱
LPS，PolyI：C，WC1535和△CPS孵育NTM后OnIRAK1和OnIRAK4的表达
图6.LPS，PolyI：C，无乳链球菌WC1535和△CPS（荚膜多糖基因簇缺失菌株）感染后，尼罗罗非鱼巨噬细胞（NTM）中OnIRAK1和OnIRAK4的表达
荧光素酶报告基因检测
图7.OnIRAK1和OnIRAK4在293T细胞中的过表达
OnIRAK1和OnIRAK4的亚细胞定位
图8.OnIRAK1和OnIRAK4在293T细胞中的亚细胞定位
免疫共沉淀（Co-IP）
图9.OnIRAK1与OnIRAK4的相互作用
总结：
本研究在尼罗河罗非鱼中发现了两个IRAK家族成员，IRAK1和IRAK4，它们具有保守的N端结构域，与其他鱼类和哺乳动物相似。IRAK1和IRAK4在所有检测的组织中均广泛表达，在血液中表达水平最高，在肝脏中表达水平最低。在胚胎发育过程中，从受精后第2天(dpf)到第8天(dpf)，这两个基因都可以被检测到。IRAK1和IRAK4在293T细胞中的过表达表明它们都分布在细胞质中，并且可以显著增加NF-κB的活化。有趣的是，转染后，IRAK1显著上调了Myd88诱导的NF-κB激活，而IRAK4对Myd88诱导的NF-κB激活没有影响。免疫共沉淀（Co-IP）分析表明Myd88不与IRAK1或IRAK4相互作用，并且IRAK1不与IRAK4相互作用。综上所述，这些发现表明IRAK1和IRAK4可能在TLR/IL-1R信号通路和对病原体入侵的免疫反应中起重要作用。
