山东省水产养殖病害防治中心
随着牙鲆鱼养殖业的发展，各类病害肆虐，其中以暴发性流行细菌病的危害最为严重。本试验主要研究由致病性弧菌、嗜水气单胞菌、爱德华氏菌引起的红头、红体、体表鳍条溃烂、腹水等疾病的防治，从而提高苗种培育与商品鱼养殖的成活率，提升经济效益。
一、实验器材
1．诊断选药盒。现在市面上有销售成品的方便型诊断选药盒，每次可进行16种抗菌药物的筛选实验，分别是：四环素、氧氟沙星、复方新诺明、青霉素、硫酸粘杆菌素、罗红霉素、庆大霉素、新霉素、强力霉素、恩诺沙星、链霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、阿米卡星、头孢拉定、阿莫西林。其他参考试验药片分别是：土霉素、头孢氨苄、阿奇霉素、卡那霉素、头孢噻呋钠、TMP、盐酸克林霉素、甲硝唑、替米考星、泰乐菌素、磺胺问甲氧嘧啶、大观霉素、红霉素、盐酸沙拉沙星、舒巴坦钠、盐酸二氟沙星。
2．自制培养基。培养皿、试管、消毒生理盐水、蛋白胨、琼脂、高压锅等。每个可做4～8个种类的药物选别。
3．生物杀菌剂。市售针对弧菌、单胞菌等的嗜细菌类生物制剂。
4．EM菌、硝化宝等微生物制剂，分解水体中有机物、氨氮、亚硝酸氮等。
5．剪刀、解剖刀、镊子、托盘等。
6．无菌操作台、酒精灯、培养箱、显微镜等。
二、实验方法
实验有两个要点，一是用传统的抗菌素治疗，通过使用诊断选药盒选取对致病菌作用最有效的抗菌素，进行药浴及投喂药饵防治；二是通过生物杀菌剂进行针对性治疗实验和生物杀菌剂加EM菌、其他微生物改良制剂的预防感染实验。
实验从三个方面进行：一是疾病治疗，利用诊断选药盒选取最佳抗菌药和用生物杀菌剂进行疾病治疗实验；二是利用特定病原菌进行疾病感染和治疗的实验；三是根据治疗实验的效果，进行针对性的疾病预防实验。
1．疾病治疗实验
(1)当鱼类出现活动异常、摄食不良、死亡增加及表现出一定的病征，采集病鱼的病灶部位进行细菌培养，用诊断选药盒进行选药实验，选取对致病菌作用力最强的抗菌药用于疾病治疗。
(2)治疗实验分两组，每组分别使用2～500升的小水池，各放入发病的鱼苗200尾，抗菌药分别用10毫克／升药浴4小时，按每千克鱼体重100毫克投喂药饵连续5天；5毫克／升药浴4小时，按每千克鱼体重50毫克投喂药饵连续5天。进行效果对比。
2．感染实验
(1)采集大量发病水池内病鱼病灶部位进行细菌分离培养鉴定，获取致病性弧菌、嗜水气单胞菌、爱德华氏菌。
(2)分别对分离获取的三种细菌进行诊断选药盒选药实验，选择对病原菌作用最强的抗菌药用于实验。同时大量培养三种细菌，达到用于攻击感染实验的用量，以便进行健康鱼苗的攻击感染实验。
(3)实验组合设定。致病菌的组合：三个单一菌种攻击感染实验(弧菌、嗜水气单胞菌、爱德华氏菌)，混合菌种攻击感染实验(弧菌+嗜水气单胞菌、弧菌+爱德华氏菌、嗜水气单胞菌+爱德华氏菌)共6种攻击感染实验组，分别编号为实验组1～6，同时设定一个无细菌攻击感染的对照组。以500升实验水池为例，每组8个500升实验小水池，入池鱼苗各200尾。根据需要，选择相应感染实验类型。
(4)感染实验的实施
A．选取全长5厘米左右的健康鱼苗，鱼苗摄食状态良好，每日死亡在0.1％以下。
B．在相应的水池各放紫外线杀菌海水300升，分别移入200尾鱼苗。
C．对照组2个水池，不添加任何细菌。每个感染实验组6个水池，2个不作任何处理；2个采用诊断选药盒选取的抗菌药10毫克／升药浴4小时后换水，每天1次，同时按每千克鱼体重100毫克口服，连续3～5天1个疗程；2个采用生物杀菌剂2毫升／米3，药浴4小时后换水，连续5天。
D．实施感染的实验水池分别按照致病菌1×105细胞数／毫升进行接种，24小时内不换水，24小时后开始转入正常培养；或者在投喂的配合饲料中喷洒接入适量相应的致病菌，当开始发现有鱼苗异常时实施相应治疗措施等。
(5)实验时间及注意事项。实验期间15天，每天吸污并记录相应水池内死鱼数量、活力和摄食情况。所有实验水池工具专池专用，严格控制交叉感染，日常操作中对照组优先进行。第15天，实验结束，统计在池鱼苗数量、活力和摄食等情况，进行数据分析。
3．预防感染实验
(1)根据诊断选药盒选取的效果最强的抗菌药和生物杀菌剂及EM菌进行病菌疾病预防实验。
(2)一般采用200～1000升的小水池进行预防实验，设定对照组、生物组、抗菌药组，每组各2个平行实验水池。
对照组：正常管理，不加任何药物、生物制剂；生物组：生物杀菌剂2毫升／米3+EM菌2毫升／米3，每3天一次预防接种，定期投喂药饵，每千克饲料加入生物杀菌剂1毫升+EM菌1毫升，与水中投放同时进行；抗菌药组：根据诊断选药盒选取的作用力强的抗菌药设定1～3个实验组，采用定期添加2毫克／升的相应抗菌药进行预防感染，每3天预防一次，同时投喂药饵，按照鱼苗体重每千克添加抗菌药20毫克，与水中投放同时进行。
(3)实验期间及注意事项。实验期共40天，选取平均全长5厘米的鱼苗开始进行预防实验，期间按照鱼苗体重的3％～4％投喂全价配合饲料，每天流水300％～500％，每天两次吸除池底污物，发现死鱼及时捞除，记录每天鱼苗死亡数量、摄食情况，每周一次测量鱼苗全长、体重，调整投饵量。第40天实验结束，统计每个水池在池鱼苗数量、全长、体重等生长情况。根据实验数据分析预防效果，确定最佳预防方法。
三、实验实施中防止病原菌扩散的措施
1．用于细菌培养实验的器材使用前后经过高温高压消毒，废弃物也要经过高温高压消毒灭菌后再丢弃。
2．实验水池等由专人负责管理，日常进出车间要进行严格消毒，更换专用水鞋、外套进入车间，实验水池有相应的专用工具。
3．由于实验期间培养大量的病原菌，为了防止病原菌污染周围环境，实验在独立的车间内进行，排出的废水经统一回收，用50毫克／升漂白精消毒24小时后，再用硫代硫酸钠50毫克／升中和后排放。实验全部结束后对整个车间用含200毫克／升有效氯的漂白精溶液全面喷洒消毒，杀灭病原菌。
全国水产技术推广总站于广宝
邮编100026
