于鑫鑫 徐龙广 (大庆志飞生物化工有限公司 黑龙江大庆 163411)
板蓝根为十字花科植物菘蓝和草大青的干燥根,植株高50~100厘米。根肥厚,近圆锥形,直径2~3厘米,长20~30厘米,表面土黄色,其短横纹极少数须根。靛蓝、靛玉红为其中的有效成分之一。板蓝根是常用中兽药,在临床上具有清热解毒、凉血利咽和消肿的功能。其传统提取工艺均为水煮醇沉,其有效成分损失过大。为了减少有效成分的损失,拟采用醇提和超滤工艺,以总氮和靛玉红含量为指标,用筛选试验对加醇倍数进行考察。并对浓缩温度、干燥温度及浓缩体积进行了比较研究,以初步确定合理的工艺条件。现介绍如下,供大家参考。
1 仪器与试剂
岛津LC-10ATvp液相仪、spD-10Avp检测器、RPL-C2000柱温箱,RE-52AA旋转蒸发仪、可调式MH5000型电热套,靛玉红对照品(购自中国药品生物制品检定所)、精氨酸对照品(购自中国药品生物制品检定所),95%乙醇(购自北京市化学试剂厂),其他所用试剂均为分析纯。购于山西省中药材公司,产地为河北安国。
2 板蓝根的提取方法
色谱柱为Shim-PackCLC-ODS、Alltech预柱,柱温为30℃,流动相为甲醇-水(80∶20)(0.1%的二乙氨,用醋酸调中性),流速为1毫升/分,检测波长为290纳米。
对照品溶液制备标准曲线,称取经五氧化二磷干燥至恒重的靛玉红对照品10.58毫克,置250毫升容量瓶中,用100毫升氯仿溶解,并加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取25毫升,置50毫升容量瓶中,添加甲醇至刻度,摇匀。分别精密吸取1.0、2.0、4.0、8.0、10毫升置10毫升容量瓶中,加入氯仿-甲醇(20∶80)的溶液至刻度,摇匀,即得浓度为1.25、2.45、4.89、8.90、17.72克/毫升的对照品溶液。20升定量环满刻度进样,按上述色谱条件测定,以靛玉红对照品进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
3 影响因素
加醇倍数。称取板蓝根药材200克,按上述最佳提取条件提取、回收乙醇、离心和超滤,得沉淀与滤渣,合并沉淀和滤渣,充分拌匀分为二等份,第一份分别用4倍和2倍乙醇提取2次,每次1小时。第二份分别用3倍和2倍乙醇提取两次,每次1小时。滤过,滤渣按浸膏供试液制备方法制备供试液,用高效液相色谱法测定,结果表明4倍和2倍乙醇提取,可把沉淀和滤渣混合物中的靛玉红提尽。乙醇体积为6倍时,靛玉红含量为0.2微克。当乙醇体积为5倍时,靛玉红含量为22.4微克。
浓缩温度。称取60克药材按最佳提取工艺提取,提取液平均分为3等份,分别在45℃、65℃、85℃条件下浓缩至浓浸膏后,按浸膏供试液制备方法制备供试液,用高效液相色谱法测定,可知浓缩温度对靛玉红含量无影响,综合考虑浓缩温度选择60℃为宜。当浓缩温度为45℃时,靛玉红含量为60.2微克。当浓缩温度为65℃时,靛玉红含量为63.5微克。当浓缩温度为80℃时,靛玉红含量为61.7微克。
干燥温度。称取300克药材,按上述工艺超滤提取。(www.nczfj.com)回收浓缩得浸膏,均分为3等份,分别在45℃、65℃、85℃烘干,烘干后按浸膏供试液制备方法制备供试液,用高效液相色谱法测定。干燥温度为45℃时,靛玉红含量为220.7微克。干燥温度为65℃时,靛玉红含量为189.1微克。干燥温度为85℃时,靛玉红含量为143.9微克。可知干燥温度对靛玉红含量有较大影响,故干燥温度选定为45℃。
浓缩体积。称取190克药材按上述最佳工艺提取,提取液过滤,滤液平均分为3等份,第1份体积不变,第2份加60%的乙醇至原体积2倍,第3份加60%的乙醇至原体积的4倍,分别在60℃条件下浓缩至浓浸膏后,按浸膏供试液制备方法制备供试液,用高效液相色谱法测定,可知浓缩体积对靛玉红含量有显著影响,故在工艺优选中,用95%的醇从滤渣与沉淀中提取靛玉红时,应用最少体积的乙醇。浓缩体积为1倍时,靛玉红含量为250.2微克。浓缩体积为2倍时,靛玉红含量为89.3微克。浓缩体积为4倍时,靛玉红含量为40.6微克。
4 结论
综上所述,加醇倍数、浓缩温度、干燥温度及浓缩体积都对板蓝根有效成分回收效率有影响,但是浓缩温度影响较小。通过对影响板蓝根提取工艺因素的分析,生产部门应根据自身实际情况来确定具体操作方法,以提高板蓝根提取的产量。