朱庆红，李 莉＊，赵 昭
（河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007）
金鱼也称金鲫鱼，是由鲫鱼演化而来的水族观赏鱼中的重要品种之一。金鱼品种繁多，色彩丰富、观赏价值高，容易饲养，因而深受广大观赏鱼爱好者的喜爱。与常规养殖鱼类一样，金鱼在大面积苗种培育、水族箱养殖过程中，会有各种传染性或侵袭性疾病的发生，患病金鱼体色和形态也会发生改变，降低其观赏价值，同时给养殖者带来一定的经济损失。目前使用水产药物是防治金鱼疾病最常用的方法，但水产药物的使用不可避免地会对金鱼产生毒性作用，急性毒性试验是药物安全性评价的基础试验，它以受试动物的死亡率为试验指标，以求得药物对受试动物的半数致死质量浓度（LC50）和安全质量浓度（SC）为常规目的。不同品种不同规格的鱼类对水产药物的敏感性不同，很多研究者对水产常用药物对鱼类的毒性试验进行过报道，而目前有关金鱼的急性毒性研究仅有涉及到大规格鱼种的少量报道。苗种培育是金鱼繁育中的关键环节，金鱼苗种体质弱，对外界环境抵抗力差，往往由于水质不佳或者敌害生物的存在而导致其大批量死亡。强氯精、二氧化氯是水产养殖中常用的消毒剂，可以杀灭水体中的各种病原微生物，戊二醛和亚甲基蓝是防治水霉病和杀灭一些小型寄生虫的常用药物，高锰酸钾常用于防治细菌性疾病和杀灭一些寄生虫，氯氰菊酯是一种高效的杀虫剂。本试验以体长1.4～40px的金鱼稚鱼为研究对象，选择以上6种常用水产药物进行急性毒性试验，旨在为金鱼及相关观赏鱼苗种培育阶段的疾病防治和安全用药提供参考。
1 材料和方法
1.1 供试鱼
供试金鱼取自新乡市郊区某金鱼养殖场，为同批次繁殖、同池饲养的稚鱼，体长1.4～40px，试验前将金鱼苗暂养在水族箱中，适应性驯养1周。挑选规格一致，反应灵敏，无病无伤的鱼苗进行试验。
1.2 供试药物
二氧化氯（有效质量分数8％，粉剂，北京华龙星宇科技发展有限公司）、水产用戊二醛（有效质量分数20％，液体，黄石农人药业有限公司）、氯氰菊酯（有效质量分数4.5％，乳剂，湖北潜江市渔药厂）、高锰酸钾（分析纯，北京化学试剂三厂）、亚甲基蓝（化学纯，山东滕州银丰化工有限公司）、强氯精（有效氯含量50％，粉剂，江苏武进养康生物科技有限公司）。试验前预先用蒸馏水将试验药物配制成一定质量浓度的母液，再根据需要稀释成合适的质量浓度。
1.3 试验条件
所有试验均在实验室内进行，使用常温静水试验法，试验用水为经过曝气24ｈ以上的自来水，pH值为7.1±0.1，试验期间水温为（24±2）℃，试验容器为750px×1000px×500px的塑料水族箱，为防止试验期间材料鱼跳出，箱上加盖网布，试验期间不投饵。
1.4 试验方法
首先根据鱼病防治的药物常用剂量，适当扩大或减小药物质量浓度进行预备试验，观察鱼苗反应及存活情况，根据预备试验的结果，在使金鱼苗全部存活（死亡率为0）的最高质量浓度和全部致死（死亡率为100％）的最低质量浓度之间，按等对数间距设计5个质量浓度，同时设1个空白对照组，每个质量浓度组设3个平行。各种药物设置的质量浓度梯度详见表1。
分别将试验药物的母液按比例稀释成所需质量浓度，将供试鱼按照从低到高的质量浓度逐个放入，每组对应的容器内各随机放入鱼苗20尾。试验开始后，先做8ｈ连续观察，观察其反应和中毒症状，然后分别记录24ｈ、48ｈ和96ｈ时在不同质量浓度药物胁迫下供试鱼的死亡数量。判断死亡的标准是用镊子夹供试鱼的尾部，如无反应，即认为鱼已经死亡，及时捞出死鱼。为保证试验药物的有效质量浓度，每隔24ｈ更换1次药液。试验结束后，根据试验数据，计算出不同时间药物对金鱼苗的半致死质量浓度和安全质量浓度。
1.5 半致死浓度和安全浓度的计算
根据不同时间段供试鱼的死亡率，用直线内插法求出24ｈ、48ｈ和96ｈ的LC50。SC按照以下公式计算：
SC＝LC50（48ｈ）×0.3/（LC50（24ｈ）/LC50（48ｈ））2。
2 结果与分析
6种水产药物对金鱼苗的急性毒性试验结果详见表1。不同药物作用后金鱼苗表现出不同的急性毒性效应。
2.1 强氯精对金鱼苗的急性毒性作用
强氯精高质量浓度组供试鱼的急性中毒症状主要表现为焦躁不安，在水底侧游，或在水中垂直游动，药液质量浓度越大，鱼游动越剧烈，身体逐渐失衡，反应迟钝，最后呆滞于水底死亡。死亡鱼的体表和鳃部黏液较多，鳃丝淤血且边缘发白。4.0mg/L时，供试鱼24ｈ死亡率100％；2.8mg/L时，供试鱼24ｈ死亡率为90％，48ｈ死亡率达100％；低质量浓度组的供试鱼没有表现出明显的中毒反应，2.0mg/L时，供试鱼24ｈ死亡率为30％，96ｈ死亡率为50％；1.4mg/L时供试鱼在24ｈ时死亡率为10％，96ｈ死亡率达到30％；在1.0mg/L强氯精作用下，72ｈ后供试鱼开始出现死亡情况，96ｈ死亡率为10％；强氯精对金鱼稚鱼的24ｈ、48ｈ和96ｈ的LC50分别为2.3mg/L，2.1mg/L和2.0mg/L，SC为0.53mg/L。
2.2 二氧化氯对金鱼苗的急性毒性作用
二氧化氯处理组在3.2mg/L和3.8mg/L时，金鱼苗没有异常反应，40ｈ后出现死亡，48ｈ死亡率为10％，96ｈ死亡率分别为20％和30％；4.5mg/L时，供试鱼24ｈ死亡率10％，96ｈ死亡率达到40％；高质量浓度二氧化氯处理下供试鱼快速游动，身体失衡，死亡前游动缓慢，呼吸困难，死后鳃盖和口张开。5.4mg/L时，供试鱼24ｈ死亡率达30％，96ｈ达到100％；而在6.4mg/L的高质量浓度处理下，供试鱼24ｈ死亡率达到80％，48ｈ达到100％。二氧化氯对金鱼稚鱼的24ｈ、48ｈ和96ｈ的LC50分别是5.8mg/L，5.4mg/L和4.7mg/L，SC为1.4mg/L。
2.3 戊二醛对金鱼苗的急性毒性作用
戊二醛作用于金鱼稚鱼后，在2.3mg/L和2.7mg/L的低质量浓度处理组，20ｈ后鱼苗开始出现死亡情况，24ｈ死亡率为10％，至96ｈ时死亡率分别达到20％和30％；中高质量浓度的戊二醛处理下，急性中毒现象表现为往水面窜动，浮头，体色变暗，高质量浓度组的供试鱼眼睛发白，整个眼眶突出。戊二醛质量浓度为3.2mg/L时，鱼苗15ｈ开始出现死亡情况，24ｈ死亡率为20％，96ｈ死亡率达到60％，质量浓度为3.7mg/L时，6ｈ开始出现死亡情况，24ｈ死亡率为70％，48ｈ死亡率达100％；在4.3mg/L的高质量浓度作用下，金鱼苗4ｈ开始死亡，24ｈ内100％死亡；戊二醛对金鱼稚鱼的24ｈ、48ｈ和96ｈ的LC50分别为3.5mg/L，3.3mg/L和3.0mg/L，SC为0.88mg/L。
2.4 高锰酸钾对金鱼苗的急性毒性作用
高锰酸钾质量浓度为1mg/L时，36ｈ后金鱼苗开始出现死亡，48ｈ死亡率为10％，96ｈ死亡率为20％，死亡金鱼体色发黄，鳍条上附有红棕色污物；1.4mg/L时，15ｈ开始出现死亡，24ｈ死亡率为10％，96ｈ死亡率达80％；质量浓度在2.0mg/L时，24ｈ的死亡率为40％，48ｈ死亡率为80％，96ｈ死亡率为100％；在高质量浓度高锰酸钾作用下，金鱼苗即刻表现出明显的中毒症状：反映迟缓，鳃变为黄色，呼吸频率加快，体色变黑。质量浓度为2.8mg/L时，金鱼苗8ｈ后开始死亡，24ｈ死亡率为60％，48ｈ死亡率为100％；在4mg/L的高锰酸钾溶液中，金鱼苗3ｈ出现死亡，24ｈ死亡率为100％。高锰酸钾对金鱼稚鱼的24ｈ、48ｈ和96ｈ的LC50分别为2.4mg/L，1.7mg/L和1.2mg/L，SC为0.26mg/L。
2.5 亚甲基蓝对金鱼苗的急性毒性作用
在高浓度亚甲基蓝作用下，金鱼苗身体失衡，游动缓慢，呼吸困难，逐渐沉至水底，金鱼死亡后体色变深，各鳍条和鳃的颜色变为蓝色。药物质量浓度为15mg/L时，20ｈ后开始出现死亡，24ｈ死亡率达到20％，96ｈ死亡率为50％；质量浓度为17.8mg/L时，24ｈ死亡率为30％，96ｈ死亡率为90％；质量浓度为21.2mg/L和25.2mg/L时，24ｈ死亡率均为40％，分别在96ｈ和48ｈ死亡率达到100％；而在30mg/L的亚甲基蓝处理下，供试鱼10ｈ开始出现死亡，24ｈ死亡率为70％；48ｈ死亡率为100％。亚甲基蓝对金鱼稚鱼的24ｈ、48ｈ和96ｈ的LC50分别为26.8mg/L，17.8mg/L和15.0mg/L，SC为2.36mg/L。
2.6 氯氰菊酯对金鱼苗的急性毒性作用
金鱼苗在0.024mg/L氯氰菊酯处理下即刻出现中毒症状，鱼体失去平衡，窜游、旋游，之后呼吸逐渐减弱至死亡，沉至水底，鱼体中毒后体色变淡，身体向一侧弯曲，眼球突出、眼底有出血点，鳍条颜色无变化，供试鱼在2ｈ后开始死亡，24ｈ死亡率为100％。在0.0098mg/L和0.0154mg/L的氯氰菊酯处理下，金鱼苗出现的中毒症状稍弱于0.024mg/L组，8～10ｈ后出现死亡，24ｈ死亡率为50％～70％，96ｈ死亡率为100％；0.004mg/L组的金鱼苗24ｈ后出现死亡，48ｈ死亡率为30％，96ｈ死亡率为40％；而在0.0062mg/L氯氰菊酯处理下，金鱼苗18ｈ后开始出现死亡，24ｈ死亡率为10％，96ｈ死亡率达到50％，氯氰菊酯对金鱼稚鱼的24ｈ、48ｈ和96ｈ的LC50分别为0.0098mg/L，0.0094mg/L和0.0062mg/L，SC为0.002mg/L。
3 讨论
强氯精又称三氯异氰尿酸（trioroisocyanuricacid，TCCA），在水产养殖中作为一种高效的消毒杀菌剂而普遍用于水体消毒，杀菌力为漂白粉的100倍左右。TCCA对无鳞鱼类和有鳞鱼类的苗种有较强的急性毒性，将云斑鮰置于4mg/L的强氯精溶液中，8ｈ死亡率达100％，SC为0.38mg/L，对剑尾鱼的SC为0.22mg/L，对南方大口鲶的SC是0.147mg/L。本试验结果表明，强氯精对金鱼稚鱼24ｈ的LC50为2.3mg/L，96ｈ的LC50为2.0mg/L，SC为0.53mg/L。而生产上养殖水体中强氯精使用一般是0.1～0.5mg/L全池泼洒，用于防治细菌性疾病。因此，从安全角度考虑，在金鱼苗种培育阶段应当慎用或禁用强氯精。
二氧化氯是一种高效低毒的广谱杀菌消毒剂，可杀死细菌芽胞、病毒、原虫和藻类等，其消毒作用不受水质、pH值、氨氮以及有机物浓度的影响，是一种绿色消毒剂。二氧化氯对鲇的SC为15.1mg/L。对鳜鱼苗的SC为0.37mg/L，本试验中，二氧化氯对金鱼苗的SC为1.4mg/L。生产上二氧化氯的全池泼洒使用质量浓度为0.1～0.2mg/L，因此在金鱼苗种培育中可以使用二氧化氯作为疾病防治的全池泼洒药物。但二氧化氯的杀菌能力随温度的降低而减弱。在使用过程中应引起注意。
戊二醛为无色油状液体，其碱性水溶液具有较好的杀菌作用，可杀灭细菌、真菌、病毒，当pH值为7.5～8.5时，杀菌作用最强，其作用效果较甲醛强2～10倍，生产上用于水产养殖环境及养殖工具的消毒。试验结果表明，戊二醛对金鱼苗的24ｈLC50为3.5mg/L，SC为0.88mg/L。高于水产用戊二醛的推荐使用剂量0.04mg/L，因此戊二醛可以在金鱼苗种培育过程的疾病防治中使用。
高锰酸钾是一种强氧化剂，其水溶液与有机物接触，能释放出新生态氧，迅速氧化有机物，从而起到杀菌、杀虫的作用，常用于防治鱼虾等细菌、真菌和寄生虫类疾病及设施、工具的消毒。生产上高锰酸钾对一般养殖鱼类常用剂量为遍洒1～2mg/L和10～20mg/L浸浴20～30min酸钾在水中容易产生二氧化锰沉淀，对鱼的鳃组织有较强的损坏作用，高锰酸钾在质量浓度很高的情况下还能氧化鱼体本身，因此鱼类对高锰酸钾非常敏感。据报道，高锰酸钾对泥鳅的SC为0.75mg/L，对白斑狗鱼幼鱼的SC为1.37mg/L，对南方大口鲶的SC为0.59mg/L。对鲇鱼苗的SC是0.82mg/L，本试验中，高锰酸钾对金鱼苗的24ｈLC50为2.4mg/L，SC为0.26mg/L，远低于生产中常规使用剂量，因此，建议除了对养殖设施和工具的消毒外，在金鱼苗种培育过程中禁用高锰酸钾。
亚甲基兰是一种氧化剂，通过氧化和还原反应起到杀菌和杀虫的作用。在水产养殖中用于防治水霉病、烂尾病、红嘴病，杀灭小瓜虫和三代虫，以及亚硝酸盐或氰化物中毒的解毒等。生产上常以0.5～1.0mg/L水体全池遍洒或10mg/L水体浸浴10～20min类水霉病。亚甲基蓝有助于增加鱼类的呼吸机能，药性温和，对鱼毒性较低，试验中对金鱼苗的24ｈLC50为26.8mg/L，SC为2.36mg/L，高于生产上常规全池泼洒的使用剂量，因此，可以作为金鱼和其他观赏鱼的疾病防治药物使用。
氯氰菊酯为拟除虫菊酯类杀虫剂，具有触杀和胃毒作用。杀虫广谱，药效迅速，水产养殖中用于杀灭水体中鱼类的敌害剑水蚤和水生昆虫的幼虫如水蜈蚣等，还用于预防和治疗鱼类的中华蚤、锚头蚤、鱼鲺等寄生虫疾病。不同鱼类对氯氰菊酯的敏感性不同，不同发育阶段的鱼对毒物的敏感性也存在着一定的差异，但氯氰菊酯对不同的鱼类均表现出较强的毒性作用，其毒性机制是影响神经膜上的Na+道，阻断神经传导，影响扰乱机体离子代谢，中毒达到一定程度后，金鱼出现抽搐，运动失调直至死亡。氯氰菊酯对白斑狗鱼幼鱼的SC是0.008mg/L，对蓝点笛鲷鱼苗的SC是0.0028mg/L，本试验中，氯氰菊酯对金鱼苗的24ｈLC50为0.0098mg/L，SC为0.0026mg/L。鉴于其毒性较强，极低剂量就能致鱼类死亡，因此，在使用过程中一定要注意操作方法，控制使用剂量，建议在苗种放养之前使用氯氰菊酯杀虫除害，而在观赏鱼苗种培育中应慎用或禁用氯氰菊酯进行全池泼洒。
同一药物对不同的鱼类表现出不同的毒性作用，SC值有一定的差异，可能与受体生物对药物的耐受性不同有关，还与供试鱼类的年龄、体长大小以及试验环境条件等有关。一般无鳞鱼类较有鳞鱼类对药物更敏感，与药物对体表直接渗透吸收有关，而对于不同发育阶段的鱼而言，鱼苗阶段的个体新陈代谢快，其吸收毒物的速率也快，因此，在鱼苗培养阶段对药物的选择使用上要慎重。目前水产养殖中滥用药物的现象非常严重，导致病原生物产生抗药性以及水体微生态环境的破坏，诱发更严重的病害发生。谨慎用药应成为一条重要原则，应选择毒性小、对水体污染小的药物，同时兼顾价格便宜和使用方便等特点。就该试验所涉及的6种水产药物而言，二氧化氯、戊二醛和亚甲基蓝等具有较强的杀菌作用，对金鱼稚鱼的安全性相对较高，是金鱼苗种培育过程中优先选择的药物。
